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雙酶切 已有5人參與
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我現(xiàn)在想把目的基因構(gòu)建到表達(dá)載體PET-30a中，選用的酶是Ecor1和Xho1，使用的Takara的快切酶。我是先將目的片段構(gòu)建至PMD-18中，然后再同表達(dá)載體同時(shí)做雙酶切，但每次T載體中目的片段可以切下來，但表達(dá)載體卻切不開，不知道是怎么回事，時(shí)間、反應(yīng)體系都是一樣的。我想問一下，大家用過快切酶嗎？反應(yīng)時(shí)間一般都要多久，說明書說5min即可，但每次酶切效果都很弱，即使我延長到2小時(shí)，或是增加質(zhì)粒的量，切下來的目的片段條帶也很弱，而載體根本切不下來（載體上兩酶切位點(diǎn)相距33bp)。大家有好的建議嗎？或是遇到過類似的問題嗎？ 我的圖片是TIFF格式，上傳不上來..... |
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3樓2015-06-24 16:08:57
li201018
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5樓2015-06-24 16:28:45
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