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bw2318木蟲 (小有名氣)
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[交流]
測定溶液中多肽含量變化的方法，不知道有沒有不用標(biāo)品的？
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取 2. 5m l 樣品溶液， 加入2.5ml 10%(W/V)的三氯乙酸(TCA)水溶液， 于漩渦混合儀上混合均勻， 靜置 10min， 然后在 4000r/min 下離心15min， 將上清液全部轉(zhuǎn)移到 50ml 容量瓶中， 并用 5%的 TCA 定容至刻度， 搖勻。 然后取 6.0ml 上述溶液置另一試管中， 加入雙縮脲試劑 4.0ml(樣液:雙縮脲試劑=3:2， V/V)， 于漩渦混合儀上混合均勻， 靜置 10min，2000r/min 離心 10min， 取上清液于 540nm 下測定 OD 值，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品溶液中的多肽濃度 C(mg/ml)， 進而可求得樣品中多肽含量。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取十個 10ml 的容量瓶， 用 5% 的 TCA 依次配制 0.0、0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 1.0、 1.2、 1.4、 1.6 和 1.8mg/ml 的 Gly-Gly-Tyr-Arg 四肽標(biāo)準(zhǔn)溶液， 然后分別取 6.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液， 加入 4.0ml 雙縮脲試劑，于漩渦混合儀上混合均勻， 靜置 10min， 2000r/min 離心 10min， 取上清液于 540nm 下測定 OD 值(以第一管做空白對照)。 以肽的濃度為橫坐標(biāo) X(mg/ml)， OD 值為縱坐標(biāo) Y，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖 1)， 得到回歸方程 y=0.3681x+0.0013， R2=1。 這是文獻《蛋白水解液中多肽含量的測定方法》（食品科學(xué)）中的一個方法，里面會用到四肽標(biāo)品，這種標(biāo)品價格有點貴 我問了附近賣試劑的公司，100mg的價格定在1800元左右。所以感覺老板會有點意見，不知道蟲友們，有沒有做過這塊的，有什么能替代的方法或標(biāo)品價格比較低的渠道。請求指點。 |
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 多肽合成技術(shù)交流 |
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7樓2016-01-05 14:39:36
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你這個方法我用過的，可以的。 然后你想用不完標(biāo)品的話，又想知道濃度，推薦用水解度這個指標(biāo)，具體的計算方法可以看文獻。 此外，單純想知道多肽濃度大小，可以通過OD220來定性判斷。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-01-16 23:32:21
9樓2016-01-26 09:35:38
李招9377
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10樓2017-10-26 15:04:04
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