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cz4869新蟲 (初入文壇)
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如何把測(cè)得基因確定到是哪個(gè)基因組上的 已有2人參與
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| 現(xiàn)在測(cè)得六倍體垂穗披堿草ADH基因的序列，由于是一代測(cè)序結(jié)果，所以測(cè)得的序列包括所有染色體上的。現(xiàn)在我想要把其分開，確定序列到底是來自哪個(gè)染色體上�，F(xiàn)在對(duì)于垂穗披堿草國(guó)內(nèi)外還沒有測(cè)得其染色體的全基因組。望大神給些意見 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行不下去了都。。。 |
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-07-12 23:16:59
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本實(shí)驗(yàn)采用半滑舌鰨成魚制備染色體，由于成魚頭腎組織明顯，因此采取體內(nèi)注射PHA，取頭腎組織作為材料制備染色體玻片。0 1. 按1.1μL/g魚體重，用一次性無菌注射器向半滑舌鰨腹腔注射PHA，水溫保持在24~25℃之間。 2. 24h后，按1.2μL/g魚體重，用一次性無菌注射器向半滑舌鰨腹腔注射0.1%秋水仙素，即每克魚體重注射秋水仙素1.2μg。 3. 2h后，靜脈抽血后解剖，取頭腎組織置于0.8%生理鹽水中，用鑷子將其撕碎以游離出細(xì)胞，4層紗布過濾，得到細(xì)胞懸液。 4. 1,800rpm離心7min，去除上清。 5. 加入適量0.8%生理鹽水中重新懸浮細(xì)胞，1,800rpm離心7min，去除上清。 6. 加入75mmol/L的KCl，37℃ 低滲處理30min，期間每隔10min輕輕上下顛倒一次，觀察是否有沉淀，若發(fā)現(xiàn)有沉淀則用4層紗布過濾。 7. 加入1-2mL卡諾固定液預(yù)固定，輕輕混勻，1,800rpm離心7min，去除上清。 8. 加入新的預(yù)冷的卡諾固定液固定頭腎細(xì)胞3次，每30分鐘更換一次固定液。 9. 冷滴片法滴片，常溫下晾干。 10. 隨機(jī)取1~2玻片用10%吉姆薩染液染色10min，自來水沖去染液，常溫干燥，顯微鏡下觀察。 11. 剩余玻片常溫老化2天后置于玻片盒中，-20℃保存。 這是一種方法，你看一下。 |
7樓2015-07-12 19:32:13
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