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banbuer2666新蟲(chóng) (初入文壇)
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dss誘導(dǎo)c57小鼠結(jié)腸炎模型提結(jié)腸RNA做real time pcr,為什么連內(nèi)參都測(cè)不出ct值? 已有1人參與
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我最近在做2%dss誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠模型,首先強(qiáng)調(diào)一下,我實(shí)驗(yàn)中用的所有方法,引物,試劑盒不是來(lái)自相關(guān)文獻(xiàn)中就是實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)用了很長(zhǎng)時(shí)間的,我個(gè)人也做過(guò)非常多的提組織RNA做real time pcr的經(jīng)驗(yàn)?蛇@次實(shí)在是沒(méi)辦法了,只好來(lái)問(wèn)問(wèn)大家。 我是看了多篇博士論文和SCI文獻(xiàn),按它們的方法取的結(jié)腸組織,然后加trizol研磨提取RNA,DNA酶1處理后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,做real time pcr。為了結(jié)果更可靠,我特意同時(shí)處理了一只沒(méi)有給藥,普通飼養(yǎng)的小鼠。 結(jié)果非常奇怪。我用的所有引物都來(lái)自SCI文獻(xiàn),這些文獻(xiàn)都是做的dss腸炎模型,小鼠品系跟我也一樣?晌业男∈缶褪桥懿怀鰜(lái)結(jié)果,ct值測(cè)不出來(lái),關(guān)鍵連內(nèi)參都跑不出來(lái),我的cDNA上樣量每個(gè)孔從1ug到5ug以上都試過(guò)了,全部都測(cè)不出ct值?赏瑫r(shí)做的那個(gè)正常小鼠的結(jié)果就非常好。我RNA都提了兩批啦,儀器也用過(guò)ABI7500和Biorad的,我同期還做了另一個(gè)課題的皮膚組織的real time pcr也沒(méi)有問(wèn)題。我甚至重新做了一批腸炎小鼠,從頭重新做還是不行。 想問(wèn)問(wèn)腸炎小鼠的RT-PCR有什么特殊之處嗎?我內(nèi)參都換了三種啦,這三種都是最新的跟我同品系小鼠dss腸炎模型的SCI文獻(xiàn)中用的呀!為什么就是做不出來(lái)? |
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