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banbuer2666新蟲 (初入文壇)
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dss誘導c57小鼠結(jié)腸炎模型提結(jié)腸RNA做real time pcr，為什么連內(nèi)參都測不出ct值？ 已有1人參與
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我最近在做2%dss誘導的結(jié)腸炎小鼠模型，首先強調(diào)一下，我實驗中用的所有方法，引物，試劑盒不是來自相關文獻中就是實驗室已經(jīng)用了很長時間的，我個人也做過非常多的提組織RNA做real time pcr的經(jīng)驗�？蛇@次實在是沒辦法了，只好來問問大家。 我是看了多篇博士論文和SCI文獻，按它們的方法取的結(jié)腸組織，然后加trizol研磨提取RNA，DNA酶1處理后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，做real time pcr。為了結(jié)果更可靠，我特意同時處理了一只沒有給藥，普通飼養(yǎng)的小鼠。 結(jié)果非常奇怪。我用的所有引物都來自SCI文獻，這些文獻都是做的dss腸炎模型，小鼠品系跟我也一樣�？晌业男∈缶褪桥懿怀鰜斫Y(jié)果，ct值測不出來，關鍵連內(nèi)參都跑不出來，我的cDNA上樣量每個孔從1ug到5ug以上都試過了，全部都測不出ct值�？赏瑫r做的那個正常小鼠的結(jié)果就非常好。我RNA都提了兩批啦，儀器也用過ABI7500和Biorad的，我同期還做了另一個課題的皮膚組織的real time pcr也沒有問題。我甚至重新做了一批腸炎小鼠，從頭重新做還是不行。 想問問腸炎小鼠的RT-PCR有什么特殊之處嗎？我內(nèi)參都換了三種啦，這三種都是最新的跟我同品系小鼠dss腸炎模型的SCI文獻中用的呀！為什么就是做不出來？ |
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banbuer2666
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halfbeer
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6樓2015-10-29 16:50:04
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