 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2833 | 回復(fù): 15 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
Mercy_新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
新手請(qǐng)教關(guān)于總RNA提取以及瓊脂糖凝膠電泳的問題！ 已有2人參與
|
|
|
各位站友們大家好，我在做苜蓿草chs基因的克隆實(shí)驗(yàn)，第一次接觸克隆實(shí)驗(yàn)，在提取總RNA以及電泳驗(yàn)證其完整性的時(shí)候出了很大的問題，提了四天了，每次跑出來的膠都像下面的樣子......詢問了師兄和師姐，他們因?yàn)闆]做過RNA的實(shí)驗(yàn)所以也不太清楚，小弟在此請(qǐng)教各位大俠了！ RNA長(zhǎng)度大約是1.2Kbp 下面是我們的實(shí)驗(yàn)過程： 總RNA提�。� 1.取新鮮的苜蓿草嫩葉分ABCD四組，每組80mg，經(jīng)1 g·L?1 次氯酸鈉消毒15 min 后, 用雙蒸水沖洗干凈, 放置-20℃冰箱保存過夜 2.實(shí)驗(yàn)用研缽用0.1%DEPC水沖洗，放-20℃冰箱預(yù)冷 3.實(shí)驗(yàn)用燒杯、鑷子、刮刀、槍頭、EP管在0.1%DEPC溶液中浸泡過夜，第二天放在37℃的烘箱中烘干。（實(shí)驗(yàn)室只有37℃烘箱......） 4.組織樣本提�。好總�(gè)樣品加三平勺石英砂，用研缽將組織在-20攝氏度冰箱中磨成粉末，四個(gè)樣品分別加1ml Trizol，放置5分鐘 5.每組加0.2ml氯仿，震蕩15秒，室溫靜置2分鐘；4攝氏度，12000轉(zhuǎn)離心15分鐘（配平用石英砂） 6.取水相于新的離心管，加0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘；4攝氏度，12000轉(zhuǎn)離心10分鐘（配平用異丙醇） 7.棄去上清液，加入1.5ml的75%乙醇，渦旋；4攝氏度，12000轉(zhuǎn)離心5分鐘（配平用 75%乙醇） 8.棄去上清液，室溫干燥7分鐘；將RNA溶于10μL的0.1%DEPC水中，-60℃保存過夜 注：所有試劑均用0.1%DEPC水配制，操作過程戴手套和口罩。每次提完總RNA，EP管底部都有很少的白色沉淀，用0.1%DEPC水可以溶解。 RNA跑膠： 1.將制膠用具用75%乙醇沖洗一遍，晾干備用。 2.電泳槽處理：3%H2O2灌滿，室溫放置10分鐘，0.1%DEPC水沖洗。 3.制膠：稱取0.4g瓊脂糖粉末，加入放有29.2mL的DEPC水的錐形瓶中，加熱使瓊脂糖完全溶解。稍冷卻后加入4mL的5xTBE、6.8mL的甲醛，2.5μl Goldview然后在膠槽中灌制凝膠，插好梳子，水平放置待凝固后使用。 4.加樣：在一個(gè)DEPC處理過的，干燥的EP管中混合以下試劑：5xTBE2μl、甲醛3.5μL、甲酰胺10μL、RNA樣品3.5μl�；靹�，置60℃保溫10min，冰上速冷。取6μL加樣于凝膠點(diǎn)樣孔內(nèi)。 5.打開電泳儀，100V電泳30分鐘 6.電泳結(jié)束后通過紫外透視儀觀察。 然后跑出來一直都是這樣的......今天下午借了學(xué)長(zhǎng)PCR完了多余的DNA（長(zhǎng)度大約為750bp），按照完全一樣的電泳條件，和我們提取的放-60℃過夜的RNA一同電泳，結(jié)果還是什么都沒看到，這到底是總RNA提取有問題呢還是瓊脂糖凝膠電泳的問題呢？希望大俠們不吝賜教！ 10000407533376.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有218人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
Mercy_
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 21
- 帖子: 6
- 在線: 1.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3971329
- 注冊(cè): 2015-07-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2015-07-18 08:32:43
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-18 13:02:10
Mercy_: 金幣+5, ★有幫助 2015-07-19 14:19:08
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-18 13:02:10
Mercy_: 金幣+5, ★有幫助 2015-07-19 14:19:08
|
膠圖可以看出，沒有提取出來核酸，是核酸，DNA RNA 都沒有 勸你用試劑盒提吧，如果苜蓿是高酚高糖的，還得用專用試劑盒 電泳必須點(diǎn)MARKER RNA提取的結(jié)果應(yīng)該是如下圖片才可以 RNA電泳圖 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
15201132樓2015-07-17 18:37:11
4樓2015-07-18 11:44:39
5樓2015-07-18 14:43:07
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +5 | 慕寒mio 2026-03-16 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +3 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個(gè)二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學(xué)材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭(zhēng) 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大 本人本科雙一流 +4 | 自由的_飛翔 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 現(xiàn)在如何回避去年的某一個(gè)專家，不知道名字 +3 | zk200107 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科院，化學(xué)方向，295求調(diào)劑 +4 | 一氧二氮 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +5 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 四川大學(xué)085601材料工程專碩 初試294求調(diào)劑 +4 | 祝我們好在冬天 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 冬十三 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +7 | 綠豆芹菜湯 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請(qǐng)求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|