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宣煊木蟲 (小有名氣)
超級木蟲
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[求助]
求教大神：植物組織中H2S含量的測定方法 已有2人參與
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求教哪位大神做過植物組織中H2S含量的測定，希望可以告知實驗中具體用到的藥品和試劑以及實驗操作步驟！在此感激不盡�。� |
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starseacow
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
宣煊: 金幣+5, ★★★很有幫助, 提供的做法可以作為參考， 2015-07-18 09:40:30
感謝參與，應助指數(shù) +1
宣煊: 金幣+5, ★★★很有幫助, 提供的做法可以作為參考， 2015-07-18 09:40:30
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Measurement of H2S content H2S quantification was performed as described by Nashef et al. (1977). The chemical treatments were the same as the measurements of Na+ and K+ contents. Following the treatments, the root of seedlings were ground into fine powder with a mortar and pestle under liquid nitrogen and 0.3 g of frozen tissue were homogenized in 1 ml 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7) containing 10 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). The homogenate was centrifuged at 15,000×g for 20 min at 4 °C, and 100 μl of the supernatant was used for the quantification of H2S, in an assay mixture also containing 1,880 μl extraction buffer and 20 μl 20 mM 5,5′- dithiobis (2-nitrobenzoic acid), to a total volume of 2 ml. The assay mixture was incubated at room temperature for 2 min and the absorbance was read at 412 nm. H2S was quantified based on a standard curve of known concentrations of NaHS 本段出自 Hydrogen sulfide is involved in maintaining ion homeostasis via regulating plasma membrane Na+/H+ antiporter system in the hydrogen peroxide-dependent manner in salt-stress Arabidopsis thaliana root Protoplasma (2014) 251:899–912 |
2樓2015-07-17 21:42:00
宣煊
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3樓2015-07-18 09:41:59
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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內(nèi)源H2S含量測定方法: 1)試劑 a, 磷酸緩沖液（PH 6.8）50 mM(含0.1M EDTA 和 0.2 M 抗壞血酸 ) b, PBS PH 7.4 100 mM c, L- Cys 10 mM d, 磷酸吡哆醛 2 mM e, 二甲基對本二胺 5mM（溶入3.5 mM H2SO4） f, 硫酸鐵銨 50 mM (溶入100 mM H2SO4) g, Na2S 溶液（配成已知濃度梯度） 2）繪制標準曲線 稱取Na2S 9H2O 0.2402g 加新沸冷卻的dd water定容至100ml. 取a 將其稀釋為0.5、1、2、4、8、16 μM 測已知濃度Na2S 670 nm吸光值，繪制標準曲線 3）測樣品中H2S含量 取0.5 g 樣品在5 ml a中冰浴研磨 將勻漿與b,c,d 混合，室溫放置，離心取上清 將裝有醋酸鋅的吸收井置于裝有上清的小測試管中，反應30 min 加0.3 ml e 加0.3 ml f |
4樓2015-07-19 11:30:29
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
宣煊: 金幣+5, ★★★很有幫助, 方法詳實，具有較大參考價值 2015-07-19 18:00:41
宣煊: 金幣+5, ★★★很有幫助, 方法詳實，具有較大參考價值 2015-07-19 18:00:41
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將試管用封口膜迅速封好，于37 度反應15 min 670 nm 測吸光值 參考Journal of Integrative Plant Biology 2008, 50 (12): 1518–1529 ， 按照文獻翻譯過來嘗試做過，但沒有成功，弄不清楚那個吸收裝置是怎么弄的，樓主可以參考下我的  ，自己仔細看看文獻，如果樓主成功了，請不吝分享 PS: 另有文獻說可以用氣相色譜法和電極法，我們這邊沒條件做，樓主如果有條件可以查閱相關(guān)文獻 另現(xiàn)在有熒光探針可以定性 祝好運 |
5樓2015-07-19 11:40:06
宣煊
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非常非常感謝！我找到了參考文獻，就是具體的做法還不大清楚，我會先試著做一下的。如果能成功定會與你分享！6樓2015-07-19 18:04:06
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