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jackie126126新蟲 (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌噬菌體培養(yǎng) 已有1人參與
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向各位前輩求助，本人在做噬菌體的研究，篩選純化后平板驗(yàn)證得到噬菌斑接近1cm的噬菌體，SM液保存，轉(zhuǎn)入液體擴(kuò)大培養(yǎng)后遇到問題。 培養(yǎng)后液體渾濁，瓊脂板檢測沒有噬菌斑，而且長未知雜菌及大腸桿菌。重復(fù)實(shí)驗(yàn)多次，都是這種結(jié)果，曾試過噬菌體SM液與大腸桿菌共同孵育1小時(shí)后接入LB培養(yǎng)；大腸桿菌培養(yǎng)5小時(shí)后接入噬菌體；大腸桿菌和噬菌體同事接入培養(yǎng)。結(jié)果都一樣，都是液體渾濁，平皿驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)長雜菌。 原因是什么？ 現(xiàn)在研究已卡住，無法繼續(xù)進(jìn)行，請前輩指點(diǎn)迷津！ |
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csyhaoge
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
jackie126126(silicare代發(fā)): 金幣+5, 謝謝參與 2015-08-10 09:56:31
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
jackie126126(silicare代發(fā)): 金幣+5, 謝謝參與 2015-08-10 09:56:31
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我是做T4噬菌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)的，長期對噬菌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。你說的這種情況可能是擴(kuò)大培養(yǎng)過程中噬菌體量接入量過少（大腸桿菌菌體量過多）導(dǎo)致了無法擴(kuò)大培養(yǎng)。因?yàn)樵诖竽c桿菌中存在抵制噬菌體的機(jī)制（限制修復(fù)系統(tǒng)：RMS，以及目前研究最熱門的CRISPIER系統(tǒng)），假如大腸桿菌量多而噬菌體個(gè)數(shù)過少時(shí)，噬菌體無法有效的對宿主進(jìn)行侵染。能否更加詳細(xì)的對你的實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行說明，我好對你實(shí)驗(yàn)過程中存在的問題進(jìn)行詳細(xì)的解析~~ 或是直接給我發(fā)消息也可以~ |
2樓2015-07-21 00:29:41
pokeryue
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4樓2019-01-16 10:23:10
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