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lancy9061新蟲 (小有名氣)
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[求助]
尿液DNA保存液 已有1人參與
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| 有誰知道用于提取尿液里病原體DNA的尿液該怎么保存嗎?其保存液的成分是什么呢?求指點,非常感謝。 |
儲備倉庫 |
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請自行準備:無水乙醇、生理鹽水、離心管。 取出析出液和洗滌液,按以下操作: a) 析出液:4.5mL加入25.5mL無水乙醇;9mL加入51mL無水乙醇。 b) 洗滌液:9mL加入21mL無水乙醇;18mL加入42mL無水乙醇。 c) 配制好的析出液及洗滌液如出現(xiàn)沉淀,可在37℃溶解,搖勻后使用。 取尿液5mL(尿液的取用量在1-5mL范圍內(nèi))置于離心管中,5000 rpm離心5分鐘,小心棄上清,向離心管中加入2mL生理鹽水,輕輕振蕩混勻,5000 rpm離心5 min,棄1900μL上清,剩余100μL上清,振蕩混勻。 加入200μL 裂解液和20μL 消化液,振蕩混勻,56℃水浴10 分鐘。 加入500μL析出液,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響DNA的提取與后續(xù)實驗。 將吸附柱放入收集管內(nèi),將上述溶液轉入吸附柱內(nèi),靜置2 min,12,000 rpm 4℃離心1 min,棄收集管內(nèi)廢液。 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL 洗滌液至吸附柱內(nèi),12,000 rpm 4℃離心1 min,棄收集管內(nèi)廢液。 將吸附柱放回收集管內(nèi),12,000 rpm 4℃離心2 min,離去殘留的洗滌液。 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 離心管內(nèi),加入30-60 μL 洗脫液,靜置3 min,12,000 rpm 4℃ 離心2 min,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存。 |
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