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lancy9061新蟲 (小有名氣)
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[求助]
尿液DNA保存液 已有1人參與
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| 有誰知道用于提取尿液里病原體DNA的尿液該怎么保存嗎？其保存液的成分是什么呢？求指點(diǎn)，非常感謝。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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請(qǐng)自行準(zhǔn)備：無水乙醇、生理鹽水、離心管。 取出析出液和洗滌液，按以下操作： a) 析出液：4.5mL加入25.5mL無水乙醇；9mL加入51mL無水乙醇。 b) 洗滌液：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。 c) 配制好的析出液及洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。 取尿液5mL(尿液的取用量在1-5mL范圍內(nèi))置于離心管中，5000 rpm離心5分鐘，小心棄上清，向離心管中加入2mL生理鹽水，輕輕振蕩混勻，5000 rpm離心5 min，棄1900μL上清，剩余100μL上清，振蕩混勻。 加入200μL 裂解液和20μL 消化液，振蕩混勻，56℃水浴10 分鐘。 加入500μL析出液，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響DNA的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 將吸附柱放入收集管內(nèi)，將上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)，靜置2 min，12,000 rpm 4℃離心1 min，棄收集管內(nèi)廢液。 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 min，棄收集管內(nèi)廢液。 將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心2 min，離去殘留的洗滌液。 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 離心管內(nèi)，加入30-60 μL 洗脫液，靜置3 min，12,000 rpm 4℃ 離心2 min，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。 |
2樓2019-03-13 09:24:57
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