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孫天陽(yáng)0304新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
T載連不上！
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| 我的目的片段1630bp，開(kāi)始擴(kuò)增目的片段時(shí)，第一次用PrimeStar沒(méi)結(jié)果，第二次用KOD有結(jié)果，加A尾后成功連T3，測(cè)序后結(jié)果完全不對(duì)，且只測(cè)出一端酶切位點(diǎn)，第三次用Hifi有結(jié)果，但一直未連上T載，操作步驟完全按照說(shuō)明書(shū)，PCR產(chǎn)物和T3各1μL，水3μL，冰浴30min，42度熱激30s，冰上2min，加250μLYEB，37度200轉(zhuǎn)1h，后涂含羧芐的平板，過(guò)夜后平板不長(zhǎng)菌，已經(jīng)連了3次了，都是不長(zhǎng)菌。PCR產(chǎn)物是膠回收后才連T載的，也嘗試過(guò)更換感受態(tài)（確定未過(guò)期）和T3，但都是不長(zhǎng)菌。我不理解的是，T3本身也有氨芐抗性，就算是沒(méi)有連上目的片段是不是也會(huì)長(zhǎng)的呀？另外如果再連不上的話該怎么辦，可否嘗試直接連表達(dá)載體。請(qǐng)各位指教！萬(wàn)分感謝！！ |
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cclh
新蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2017-05-03 13:48:10
楊小燈123
新蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2018-04-18 14:30:00
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