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孫天陽0304新蟲 (初入文壇)
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[求助]
T載連不上！
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| 我的目的片段1630bp，開始擴增目的片段時，第一次用PrimeStar沒結(jié)果，第二次用KOD有結(jié)果，加A尾后成功連T3，測序后結(jié)果完全不對，且只測出一端酶切位點，第三次用Hifi有結(jié)果，但一直未連上T載，操作步驟完全按照說明書，PCR產(chǎn)物和T3各1μL，水3μL，冰浴30min，42度熱激30s，冰上2min，加250μLYEB，37度200轉(zhuǎn)1h，后涂含羧芐的平板，過夜后平板不長菌，已經(jīng)連了3次了，都是不長菌。PCR產(chǎn)物是膠回收后才連T載的，也嘗試過更換感受態(tài)（確定未過期）和T3，但都是不長菌。我不理解的是，T3本身也有氨芐抗性，就算是沒有連上目的片段是不是也會長的呀？另外如果再連不上的話該怎么辦，可否嘗試直接連表達(dá)載體。請各位指教！萬分感謝！！ |
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2樓2017-05-03 13:48:10
楊小燈123
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 16.6
- 帖子: 7
- 在線: 9.1小時
- 蟲號: 7400500
- 注冊: 2017-10-31
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
3樓2018-04-18 14:30:00
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