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[交流]
DNA凝膠電泳
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小弟用的是變性聚丙烯酰胺凝膠分離小于50個(gè)堿基的單鏈DNA，丙烯酰胺濃度20%， 100V電壓，跑2-3h。發(fā)現(xiàn)DNA條帶非常弱，基本看不出堿基，但是marker非常清晰（Low MW DNA Marker，25, 50, 75, 100, 150, 200, 300, 400, 500 bp）。 請(qǐng)問(wèn)：1，上樣的DNA的濃度是多少？開(kāi)始用60nM沒(méi)有做條帶來(lái)，后來(lái)用大濃度，大約300nM，還是沒(méi)有條帶，非常弱。 2，需要1500V預(yù)電泳嗎，我沒(méi)有進(jìn)行這一步。 3，我做的實(shí)驗(yàn)條件有沒(méi)有什么問(wèn)題？ 4，50個(gè)單鏈的DNA跑出的條帶是對(duì)應(yīng)于marker的25bp還是50bp？ 完全互補(bǔ)配對(duì)的雙鏈DNA，每條鏈都是50個(gè)堿基，跑出的條帶對(duì)應(yīng)的是50bp還是100bp，謝謝！ 1.jpg |
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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那就是7M尿素，濃度沒(méi)有什么問(wèn)題，不過(guò)最好后加水補(bǔ)到10ml，直接加3ml水總體積會(huì)超過(guò)去。那你注意一下上樣前變性，再確定一下樣品沒(méi)有降解，應(yīng)該問(wèn)題不大。如果實(shí)在染不出來(lái)，可以考慮化學(xué)標(biāo)記(生物素或者地高辛)或者同位素(磷32)標(biāo)記，太短的單鏈DNA有時(shí)候就是不好染，你可以把marker也變性一下再跑。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
15樓2015-07-27 19:18:36
小泓楊
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 19:58:15
午夜魔蘭: 金幣+3 2015-07-25 20:36:48
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
送紅花一朵myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 19:58:15
午夜魔蘭: 金幣+3 2015-07-25 20:36:48
| 預(yù)電泳很容易忘。但是，有些事是真理的事就必須做。預(yù)電泳的目的就是除去介質(zhì)中的雜質(zhì)，如介質(zhì)為PAG時(shí)，還可以清除凝膠中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有劇毒，但是聚丙烯酰胺卻沒(méi)有毒。預(yù)電泳是設(shè)計(jì)在加樣前的，估計(jì)時(shí)間為一小時(shí)。 |
2樓2015-07-25 19:06:05
3樓2015-07-25 20:02:09
4樓2015-07-25 20:36:59
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