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conanyangqun新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助，關于玉米原生質體轉化后的濃度問題 已有1人參與
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各位蟲友，本蟲最近在用玉米的原生質體做亞細胞定位的實驗。按照sheen lab的方法，做了10次左右，只成功過一次。遇到的問題如下： 已經成功提取到了健康的原生質體，500ul MMg重懸后在10X的物鏡下大約有200-300個原生質體。然后取100ul加10ug質粒、110ul PEG轉化，轉化完畢用450ul W5溶液終止反應，之后離心去除PEG。再轉移到6孔板上，用1ml W5暗培養(yǎng)。8h后制片觀察。 發(fā)現(xiàn)，在10X的物鏡下，一張片子幾乎看不到幾個原生質體。請問這是怎么回事啊？原生質體都破碎了么？ 將1ml轉化后的離心去除大部分溶液后，再次制片，這樣在10X的物鏡下一個視野可以看到4-5個原生質體。 請問各位蟲友，是原生質體的濃度太低么？在轉化的時候加入的原生質體應該有很多吧，是都破碎了么？ 急等！謝謝！ |
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5樓2016-01-30 11:25:52
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6樓2016-01-30 11:27:34
7樓2017-06-20 10:29:38
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