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conanyangqun新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助，關(guān)于玉米原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化后的濃度問題 已有1人參與
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各位蟲友，本蟲最近在用玉米的原生質(zhì)體做亞細(xì)胞定位的實(shí)驗(yàn)。按照sheen lab的方法，做了10次左右，只成功過一次。遇到的問題如下： 已經(jīng)成功提取到了健康的原生質(zhì)體，500ul MMg重懸后在10X的物鏡下大約有200-300個(gè)原生質(zhì)體。然后取100ul加10ug質(zhì)粒、110ul PEG轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化完畢用450ul W5溶液終止反應(yīng)，之后離心去除PEG。再轉(zhuǎn)移到6孔板上，用1ml W5暗培養(yǎng)。8h后制片觀察。 發(fā)現(xiàn)，在10X的物鏡下，一張片子幾乎看不到幾個(gè)原生質(zhì)體。請(qǐng)問這是怎么回事��？原生質(zhì)體都破碎了么？ 將1ml轉(zhuǎn)化后的離心去除大部分溶液后，再次制片，這樣在10X的物鏡下一個(gè)視野可以看到4-5個(gè)原生質(zhì)體。 請(qǐng)問各位蟲友，是原生質(zhì)體的濃度太低么？在轉(zhuǎn)化的時(shí)候加入的原生質(zhì)體應(yīng)該有很多吧，是都破碎了么？ 急等！謝謝！ |
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