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一點(diǎn)靈性新蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白質(zhì)二硫鍵的定量（烷基化法）求助
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本人正在用——碘代乙酰胺和碘代乙酸鈉試劑——的方法，來做蛋白的二硫鍵數(shù)量的測定，但是該方法的Protocol以及試劑的濃度，用量都還不太了解，請(qǐng)大神現(xiàn)身幫個(gè)忙吧，小弟感激不盡 |
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一點(diǎn)靈性
新蟲 (初入文壇)
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- 蟲號(hào): 3622293
- 注冊: 2015-01-01
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
2樓2015-07-29 09:45:57
1012203014
金蟲 (正式寫手)
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測定總巰基含量時(shí)，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時(shí)，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應(yīng)60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對(duì)照。 巰基含量的計(jì)算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質(zhì)為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 問題3：由于毛發(fā)樣品中含有非水溶性蛋白，又沒喲測量二硫鍵含量的更好的方法 |
3樓2015-09-29 08:45:18
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