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moyunzhi銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于western blot的問(wèn)題一大堆，求給位幫忙解答下之2（補(bǔ)充） 已有1人參與
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發(fā)完第一個(gè)帖子，就又想到了一大堆的問(wèn)題。再補(bǔ)刀一下。望大牛們的解答！ 1.在SDS-PAGE電泳時(shí)， 分離膠的 濃度與分離的蛋白質(zhì)大小的關(guān)系是怎么樣的？另外，我如果分離一個(gè)225KD的蛋白，用8%的分離膠，另外我還需要檢測(cè)一個(gè)35KD的蛋白，會(huì)不會(huì)影響很大？ 2.為什么濃縮膠基本上都是4%的？這是經(jīng)驗(yàn)所得？還是有一定原理？ 3.公司賣的MARKER，可以自己做嗎？為什么marker上有的蛋白可以顯出顏色？（我猜測(cè)公司是將不同大小的蛋白分開(kāi)提純的，對(duì)其中一部分蛋白用染料結(jié)合。最后混勻出售？不知道有沒(méi)有道理？） 4.蛋白的上樣量是不是根據(jù)蛋白的濃度確定的？一般蛋白的濃度需要在多少可以顯出適當(dāng)?shù)念伾�？（或者說(shuō)其濃度要視蛋白的抗原表位的多上也就是一抗對(duì)此的效價(jià)多少來(lái)單獨(dú)確定？） 就是這些了。小弟還在大二，跟著老師做實(shí)驗(yàn)，可以老師每天都很忙，一問(wèn)問(wèn)題，老師就說(shuō)自己去查�？墒嵌饶锊惶孔V，搜出來(lái)的都不是我想問(wèn)的。簡(jiǎn)直是浪費(fèi)我時(shí)間。這些問(wèn)題又沒(méi)有人提問(wèn)過(guò)，少有人知道。實(shí)驗(yàn)室里的其他伙伴更是一問(wèn)三不知。做這個(gè)實(shí)驗(yàn)心太累了（從暑假開(kāi)始一直在做，每天就這樣單調(diào)的重復(fù)著，一點(diǎn)希望的影子都看不到，我覺(jué)得自己已經(jīng)很有耐心了吧？）。沒(méi)有人知道。照著步驟做（因?yàn)檫@還是預(yù)實(shí)驗(yàn)，很多條件都還在摸索中，有種盲人摸象的感覺(jué)），又常常出現(xiàn)問(wèn)題。每一次失敗，都會(huì)很沮喪。 小弟又不知道該怎樣去分析問(wèn)題。從來(lái)沒(méi)人教過(guò)，老師總是匆匆出現(xiàn)問(wèn)幾個(gè)問(wèn)題，變一個(gè)條件又接著做，我簡(jiǎn)直無(wú)語(yǔ)到底。查資料又該如何開(kāi)始呢?真希望有一位大神來(lái)指點(diǎn)下小弟。小弟實(shí)在困惑�。� |
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3樓2015-07-29 11:13:14
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5樓2015-07-30 04:18:37
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