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moyunzhi銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于western blot的問題一大堆,求給位幫忙解答下之2(補(bǔ)充) 已有1人參與
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發(fā)完第一個(gè)帖子,就又想到了一大堆的問題。再補(bǔ)刀一下。望大牛們的解答! 1.在SDS-PAGE電泳時(shí), 分離膠的 濃度與分離的蛋白質(zhì)大小的關(guān)系是怎么樣的?另外,我如果分離一個(gè)225KD的蛋白,用8%的分離膠,另外我還需要檢測(cè)一個(gè)35KD的蛋白,會(huì)不會(huì)影響很大? 2.為什么濃縮膠基本上都是4%的?這是經(jīng)驗(yàn)所得?還是有一定原理? 3.公司賣的MARKER,可以自己做嗎?為什么marker上有的蛋白可以顯出顏色?(我猜測(cè)公司是將不同大小的蛋白分開提純的,對(duì)其中一部分蛋白用染料結(jié)合。最后混勻出售?不知道有沒有道理?) 4.蛋白的上樣量是不是根據(jù)蛋白的濃度確定的?一般蛋白的濃度需要在多少可以顯出適當(dāng)?shù)念伾浚ɑ蛘哒f其濃度要視蛋白的抗原表位的多上也就是一抗對(duì)此的效價(jià)多少來單獨(dú)確定?) 就是這些了。小弟還在大二,跟著老師做實(shí)驗(yàn),可以老師每天都很忙,一問問題,老師就說自己去查?墒嵌饶锊惶孔V,搜出來的都不是我想問的。簡(jiǎn)直是浪費(fèi)我時(shí)間。這些問題又沒有人提問過,少有人知道。實(shí)驗(yàn)室里的其他伙伴更是一問三不知。做這個(gè)實(shí)驗(yàn)心太累了(從暑假開始一直在做,每天就這樣單調(diào)的重復(fù)著,一點(diǎn)希望的影子都看不到,我覺得自己已經(jīng)很有耐心了吧?)。沒有人知道。照著步驟做(因?yàn)檫@還是預(yù)實(shí)驗(yàn),很多條件都還在摸索中,有種盲人摸象的感覺),又常常出現(xiàn)問題。每一次失敗,都會(huì)很沮喪。 小弟又不知道該怎樣去分析問題。從來沒人教過,老師總是匆匆出現(xiàn)問幾個(gè)問題,變一個(gè)條件又接著做,我簡(jiǎn)直無語(yǔ)到底。查資料又該如何開始呢?真希望有一位大神來指點(diǎn)下小弟。小弟實(shí)在困惑! |
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