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[交流]
定點突變問題，做的很不順啊，希望哪位大神指點一下 已有5人參與
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| 求助，想請問做基因的定點突變，引物如何設計，有什么原則嗎？比如說是C變成A，G變成T？，是不是得到的產(chǎn)物只要在預測網(wǎng)站上顯示，不再出現(xiàn)對應的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點就可以啊。。。最近做的很不順，總是出現(xiàn)其他的突變，并且得到的產(chǎn)物比目的序列長幾十bp，真是太頭疼了。。。希望各位大神能幫助我分析分析啊，拜托！ |
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隨風飄搖11
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2樓2015-08-03 08:25:52
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| 我也是做定點突變的，突變位點的引物我是在線設計的http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi，這個網(wǎng)址應該能幫助你，而且也很容易設計，還有一對引物就用之前擴增目的基因全長的那對引物就好了，用重疊延伸PCR做定點突變較為快捷，而且PCR過程中要用高保真酶防止上下游片段尾部加A，我用的是TAKARA的pfu酶，挺好用的。 |
3樓2015-08-03 11:19:06
siriusxuan
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4樓2015-08-03 17:29:21
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5樓2015-09-17 14:45:25
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恩 剛好我們就是做點突變的 我來說幾句 我們設計引物的原則 是保守，就是三個堿基如果變其中一個就可以達到突變效果我們就選擇變一個 ，然后突變位點前18個后12個 一般是三十個堿基 你說的特異性不好或者多P了一段 我們也會遇到 試著多做幾次或者換臺機器試試 或者換高保真酶 希望對你有幫助 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2015-09-17 17:09:16
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