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Dane磊叔新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
定點(diǎn)突變問(wèn)題，做的很不順啊，希望哪位大神指點(diǎn)一下 已有5人參與
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| 求助，想請(qǐng)問(wèn)做基因的定點(diǎn)突變，引物如何設(shè)計(jì)，有什么原則嗎？比如說(shuō)是C變成A，G變成T？，是不是得到的產(chǎn)物只要在預(yù)測(cè)網(wǎng)站上顯示，不再出現(xiàn)對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)就可以啊。。。最近做的很不順，總是出現(xiàn)其他的突變，并且得到的產(chǎn)物比目的序列長(zhǎng)幾十bp，真是太頭疼了。。。希望各位大神能幫助我分析分析啊，拜托！ |
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
| 我也是做定點(diǎn)突變的，突變位點(diǎn)的引物我是在線設(shè)計(jì)的http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi，這個(gè)網(wǎng)址應(yīng)該能幫助你，而且也很容易設(shè)計(jì)，還有一對(duì)引物就用之前擴(kuò)增目的基因全長(zhǎng)的那對(duì)引物就好了，用重疊延伸PCR做定點(diǎn)突變較為快捷，而且PCR過(guò)程中要用高保真酶防止上下游片段尾部加A，我用的是TAKARA的pfu酶，挺好用的。 |
3樓2015-08-03 11:19:06
隨風(fēng)飄搖11
木蟲(chóng) (著名寫手)
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2樓2015-08-03 08:25:52
siriusxuan
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4樓2015-08-03 17:29:21
chenleihefei
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5樓2015-09-17 14:45:25
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