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DandelionLS銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
關于TA克隆的連接，T載體及大腸桿菌JM109的限制修飾系統(tǒng) 已有1人參與
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1.平時我們設計的引物5’端是非磷酸化的，所以PCR產物在與T載體連接時相應PCR產物5‘端是沒有連接的，這個地方的缺口要怎么修復？是依靠宿主的修復系統(tǒng)？ 2.咱們從公司購買的T載體是線性的，未去磷酸化，這樣的話是不是本身就有自連的可能呢？ 3.基因工程中作為制作感受態(tài)的大腸桿菌細胞是否是限制-修飾系統(tǒng)缺陷菌？缺陷程度是什么樣呢？ 4.和第3題差不多同類問題，用大腸桿菌JM109克隆質粒，從中提取的質粒是否部分序列被甲基化？ 5.利用質粒作為模板PCR反應產生新的序列，磷酸化自連接后用Dpn1酶切處理，說是除去原來的質粒序列，是這樣的嗎？ 注：可能3,4,5為同一類問題。 |
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zhaodahe
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3樓2015-08-05 09:57:51
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