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[求助]
關(guān)于復(fù)性：GSH/GSSG和二硫鍵折疊是什么關(guān)系？ 已有1人參與
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求助�。�！ 實(shí)驗(yàn)室做復(fù)性會(huì)加入GSH和GSSG，一般比例是GSH/GSSG=10：1，這應(yīng)該是提供了一個(gè)相對(duì)還原的環(huán)境給蛋白，這個(gè)過(guò)程一般是4°攪拌過(guò)夜。而后透析PBS 2次，如果復(fù)性成功的話可以得到蛋白，有時(shí)蛋白會(huì)沉淀完。 這個(gè)GSH和GSSG的加入應(yīng)該是維持一定的氧還電位，幫助蛋白二硫鍵的折疊，但是二硫鍵的折疊應(yīng)該是在一個(gè)相對(duì)氧化的環(huán)境比較好。所以應(yīng)該是GSSG>GSH。但是不少資料上看的都是GSH>GSSG  有點(diǎn)搞糊涂了。加入GSH和GSSG的過(guò)程是蛋白質(zhì)折疊的過(guò)程嗎？還是透析PBS的過(guò)程才是折疊的過(guò)程。真的暈了。  |
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3樓2015-08-05 14:00:00
imyting
至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xissy: 金幣+5 2015-08-05 13:54:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xissy: 金幣+5 2015-08-05 13:54:47
| 這時(shí)相當(dāng)于構(gòu)建一個(gè)氧化還原系統(tǒng)，控制二硫鍵的形成速度；因?yàn)樾枰鞍紫日_折疊，這樣才能在正確的位置形成二硫鍵；至于你說(shuō)的GSH濃度高于GSSG這是正常的，加入GSH的目的就是延緩二硫鍵形成，在你開(kāi)始復(fù)性時(shí)可能蛋白已經(jīng)有了錯(cuò)誤的二硫鍵，需要先打開(kāi)，等蛋白折疊的差不多了更容易形成正確的二硫鍵。 |
2樓2015-08-05 11:36:38
imyting
至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
xissy: 金幣+5, 感覺(jué)好深?yuàn)W。加入GSSG/GSH確實(shí)提高了可溶的有活性的表達(dá)，在其他的開(kāi)放系統(tǒng)中。就是不明白加了GSSG/GSH的比例是怎么判定的。還是謝謝啦。 2015-08-06 15:15:22
xissy: 金幣+5, 感覺(jué)好深?yuàn)W。加入GSSG/GSH確實(shí)提高了可溶的有活性的表達(dá)，在其他的開(kāi)放系統(tǒng)中。就是不明白加了GSSG/GSH的比例是怎么判定的。還是謝謝啦。 2015-08-06 15:15:22
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嗯，你說(shuō)的表達(dá)過(guò)程中加入GSSG和GSH,我認(rèn)為如果是可溶表達(dá)的話是有意義的，如果是包涵體表達(dá)就沒(méi)什么用了；但是如果是可溶表達(dá)的話，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中本來(lái)就有GSSG，如果是為了促進(jìn)二硫鍵形成的話，實(shí)在是沒(méi)有必要，我覺(jué)得可能還是想起到一定的延緩左右。 |
4樓2015-08-06 11:30:56
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