 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (6483)
- >導(dǎo)師招生 (1319)
- >考研 (1208)
- >基金申請(qǐng) (535)
- >文獻(xiàn)求助 (508)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (365)
- >考博 (282)
- >休閑灌水 (195)
- >碩博家園 (166)
- >論文投稿 (152)
- >招聘信息布告欄 (104)
- >博后之家 (89)
- >公派出國(guó) (47)
- >論文道賀祈福 (35)
- >綠色求助(高懸賞) (31)
- >SciFinder/Reaxys (30)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3525 | 回復(fù): 21 | |||
ggyy0911鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[求助]
畢赤酵母在篩選板上長(zhǎng)的很好，但是PCR鑒定不出來(lái)是怎么回事？ 已有3人參與
|
||
|
我做的GS115，pPIC9k載體還有X33，pPICZαA載體。一個(gè)用His缺陷篩選，一個(gè)用zeocin濃度篩選。 電轉(zhuǎn)之后兩者都長(zhǎng)的很好，甚至zeocin 100ug/ml的板子，之前做電轉(zhuǎn)都沒(méi)長(zhǎng)幾個(gè)，這幾次也長(zhǎng)的不錯(cuò)。G418濃度也篩到0.3mg/ml了。 可是我怎么都鑒定不出來(lái)。要不就是好不容易P出來(lái)，條帶大小又不是很符合。 通用引物又只P出來(lái)了一條帶，所以我完全沒(méi)辦法確定到底是怎么回事。 說(shuō)沒(méi)轉(zhuǎn)進(jìn)去吧，它又長(zhǎng)的很好。說(shuō)轉(zhuǎn)進(jìn)去了吧，我又P不出來(lái)。 我用別人鑒定過(guò)的樣品試驗(yàn)了一下，一端通用一端特異能P出來(lái)，但是兩端通用結(jié)果也不好，一條酵母自身，一條空載500bp。 然后PCR了我做電轉(zhuǎn)的線性化質(zhì)粒，也能P出條帶。說(shuō)明我的質(zhì)粒，酶，體系都沒(méi)啥問(wèn)題吧？ 唯一的解釋就是沒(méi)轉(zhuǎn)進(jìn)去和沒(méi)轉(zhuǎn)進(jìn)去該轉(zhuǎn)的。 沒(méi)轉(zhuǎn)進(jìn)去，那不會(huì)長(zhǎng)，我做了對(duì)照。雖然位轉(zhuǎn)的酵母能在篩選平板上生長(zhǎng)，但絕對(duì)不會(huì)長(zhǎng)的這么密，而且個(gè)大圓潤(rùn)飽滿(mǎn)。 沒(méi)轉(zhuǎn)進(jìn)去該轉(zhuǎn)的，我的線性化質(zhì)粒是新鮮的，已測(cè)序，從提質(zhì)粒到純化完成會(huì)跑兩次膠確定大小。電轉(zhuǎn)期間有什么步驟會(huì)讓質(zhì)粒破碎嗎？那我之前做也沒(méi)問(wèn)題呀。 考慮過(guò)質(zhì)粒殘留污染，恰好我期間用了一次全新的電擊杯，用這些新電擊杯的樣，同樣存在這種問(wèn)題。 并且之前也已經(jīng)做了將近10次了，電擊杯也一直重復(fù)利用，沒(méi)有這種情況出現(xiàn)。 再做，也不知道該從哪找原因了。求高人救救我吧��！半個(gè)月來(lái)就死在這了，實(shí)在不能相信居然連轉(zhuǎn)三次P不出來(lái)。 和從前唯一的區(qū)別是這三次去做我-80凍存過(guò)感受態(tài)，最多就凍存了4個(gè)小時(shí)，因?yàn)榻璧膬x器，得配合那邊的時(shí)間。但是凍存應(yīng)該只影響轉(zhuǎn)化效率吧，我的板子長(zhǎng)的真心是好啊。到底是什么原因?qū)е滤b定不出來(lái)呢��！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 蛋白表達(dá)純化鑒定精華 |
» 猜你喜歡
307求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
288求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
294求調(diào)劑材料與化工專(zhuān)碩
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
296求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
085600材料與化工 求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
生物學(xué)調(diào)劑招人�。�！
已經(jīng)有4人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
分子實(shí)驗(yàn)，有時(shí)候就是步驟都對(duì)，結(jié)果卻總是有些偏差，所以說(shuō)分子實(shí)驗(yàn)有個(gè)好運(yùn)氣也是很重要的， 看你分析的這么細(xì)致，我就畫(huà)蛇添足一下，1、會(huì)不會(huì)是引物的問(wèn)題，重新設(shè)計(jì)下引物；2、提取轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒，酶切鑒定，可以用多次多個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶驗(yàn)證，查看是不是你的完整質(zhì)粒。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
ggyy0911
3樓2015-08-07 13:47:20
awaken2013
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 26 (小學(xué)生)
- 金幣: 137.9
- 紅花: 15
- 帖子: 243
- 在線: 149.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2854550
- 注冊(cè): 2013-12-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2015-08-07 12:24:27
ggyy0911
鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1093.6
- 散金: 16
- 紅花: 8
- 帖子: 510
- 在線: 148.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1888956
- 注冊(cè): 2012-07-11
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 臨床獸醫(yī)學(xué)
4樓2015-08-07 15:51:42
ggyy0911
鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1093.6
- 散金: 16
- 紅花: 8
- 帖子: 510
- 在線: 148.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1888956
- 注冊(cè): 2012-07-11
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 臨床獸醫(yī)學(xué)
5樓2015-08-07 15:55:11
6樓2015-08-07 16:54:51
awaken2013
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 26 (小學(xué)生)
- 金幣: 137.9
- 紅花: 15
- 帖子: 243
- 在線: 149.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2854550
- 注冊(cè): 2013-12-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
7樓2015-08-07 17:39:42
awaken2013
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 26 (小學(xué)生)
- 金幣: 137.9
- 紅花: 15
- 帖子: 243
- 在線: 149.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2854550
- 注冊(cè): 2013-12-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
8樓2015-08-07 17:42:01
9樓2015-08-24 10:46:48
ggyy0911
鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1093.6
- 散金: 16
- 紅花: 8
- 帖子: 510
- 在線: 148.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1888956
- 注冊(cè): 2012-07-11
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 臨床獸醫(yī)學(xué)
10樓2015-08-26 07:54:37
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 ggyy0911 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 生物學(xué)調(diào)劑招人�。。� +3 | 山海天嵐 2026-03-17 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+6
|
.6lL 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料專(zhuān)碩274一志愿陜西師范大學(xué)求調(diào)劑 +8 | 薛云鵬 2026-03-13 | 8/400 |
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +5 | 陽(yáng)陽(yáng)哇塞 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專(zhuān)業(yè) 282分求調(diào)劑 +5 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +3 | 申子申申 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +6 | 緒幸與子 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)，327分，材料與化工085600 +3 | Ncdx123456 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料080500調(diào)劑求收留 +4 | 一顆meteor 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專(zhuān)碩英一數(shù)二306 +5 | z1z2z3879 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +4 | Tyoumou 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 26研0 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專(zhuān)利，省、國(guó)級(jí)證書(shū)40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854控制工程 359求調(diào)劑 可跨專(zhuān)業(yè) +3 | 626776879 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856專(zhuān)碩279求調(diào)劑 +5 | 加油加油！? 2026-03-15 | 5/250 |
|