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buxu金蟲 (小有名氣)
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[求助]
提取血液DNA的疑問 已有2人參與
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新手求問幾個提取血液DNA的問題： 1、血液采集用的采血管用不用無菌的？目前市面上的好像大部分都不是無菌的； 2、打算采集完后離心分出血漿，剩下的血細(xì)胞-80凍起來以后提，我看論壇里有人問過，這樣應(yīng)該沒問題； 3、如果血細(xì)胞要分裝的話，分裝的凍存管、吸取用的一次性滴管或槍頭要不要滅菌？ 4、另外還有個疑問就是，我看他們提組織DNA的，采集組織時用的解剖用具，包裝的錫箔紙也并沒有滅菌，所以提DNA是不是并不一定要嚴(yán)格滅菌？ 純屬新手，期待大家的解答 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
buxu: 金幣+20, ★★★很有幫助 2015-08-11 12:47:11
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個人觀點(diǎn)，我們實(shí)驗(yàn)室對提取血液DNA的要求不高，因?yàn)檠篋NA很好提，根本不用擔(dān)心提不出來的問題。 1、如果買的新的采血管的話，一般都有抗凝劑的，可以直接采血樣 2、如果你打算采集血樣之后分裝的話，最好馬上分裝然后凍起來，-40或-80都可以，之后要用的話可以直接解凍就可以用了，為了不使其凝固，也可以在分裝的離心管里加些抗凝劑之類的，避免時間過長在外面形成血塊，提DNA的時候不好消化。 3、要分裝用的你說的凍存管，槍頭或者離心管都是要高壓的。因?yàn)橐话阍趯?shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)的話必備的就是東西都是要壓過的才行。 4、不用嚴(yán)格滅菌的，因?yàn)椴幌衽囵B(yǎng)細(xì)胞那樣要在無菌環(huán)境下操作，直接在普通的實(shí)驗(yàn)臺上就可以完成。 |
2樓2015-08-11 12:30:00
buxu
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3樓2015-08-11 12:50:22
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4樓2015-08-11 13:59:57
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一般加肝素或者枸櫞酸鈉。但是量我不知道加多少，這是百度的，你參考下。 肝素是加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ)滅活絲氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，從而阻止血液凝固。肝素是紅細(xì)胞透滲脆性試驗(yàn)的理想抗凝劑。但不適于CBC、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查。每毫升血液肝素用量為（15±2.5)U，多為肝素鈉鹽或鉀鹽。 枸櫞酸鹽常用有枸櫞酸鈉，能與血液中鈣離子結(jié)合形成螯合物，阻止血液凝固。枸櫞酸鹽抗凝劑的抗凝力不如上述抗凝劑。枸櫞酸鈉與血液的抗凝比例為l：9或1：4.適用于紅細(xì)胞沉降率、凝血檢查，是輸血保養(yǎng)液的成分。 |
5樓2015-08-12 18:39:22
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6樓2015-08-13 07:48:38
濤聲依舊ok
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7樓2016-06-21 15:54:34
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