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buxu金蟲 (小有名氣)
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[求助]
提取血液DNA的疑問 已有2人參與
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新手求問幾個(gè)提取血液DNA的問題: 1、血液采集用的采血管用不用無菌的?目前市面上的好像大部分都不是無菌的; 2、打算采集完后離心分出血漿,剩下的血細(xì)胞-80凍起來以后提,我看論壇里有人問過,這樣應(yīng)該沒問題; 3、如果血細(xì)胞要分裝的話,分裝的凍存管、吸取用的一次性滴管或槍頭要不要滅菌? 4、另外還有個(gè)疑問就是,我看他們提組織DNA的,采集組織時(shí)用的解剖用具,包裝的錫箔紙也并沒有滅菌,所以提DNA是不是并不一定要嚴(yán)格滅菌? 純屬新手,期待大家的解答 |
金蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
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個(gè)人觀點(diǎn),我們實(shí)驗(yàn)室對(duì)提取血液DNA的要求不高,因?yàn)檠篋NA很好提,根本不用擔(dān)心提不出來的問題。 1、如果買的新的采血管的話,一般都有抗凝劑的,可以直接采血樣 2、如果你打算采集血樣之后分裝的話,最好馬上分裝然后凍起來,-40或-80都可以,之后要用的話可以直接解凍就可以用了,為了不使其凝固,也可以在分裝的離心管里加些抗凝劑之類的,避免時(shí)間過長(zhǎng)在外面形成血塊,提DNA的時(shí)候不好消化。 3、要分裝用的你說的凍存管,槍頭或者離心管都是要高壓的。因?yàn)橐话阍趯?shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)的話必備的就是東西都是要壓過的才行。 4、不用嚴(yán)格滅菌的,因?yàn)椴幌衽囵B(yǎng)細(xì)胞那樣要在無菌環(huán)境下操作,直接在普通的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上就可以完成。 |
金蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
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一般加肝素或者枸櫞酸鈉。但是量我不知道加多少,這是百度的,你參考下。 肝素是加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)滅活絲氨酸蛋白酶作用,阻止凝血酶的形成,并阻止血小板聚集等作用,從而阻止血液凝固。肝素是紅細(xì)胞透滲脆性試驗(yàn)的理想抗凝劑。但不適于CBC、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查。每毫升血液肝素用量為(15±2.5)U,多為肝素鈉鹽或鉀鹽。 枸櫞酸鹽常用有枸櫞酸鈉,能與血液中鈣離子結(jié)合形成螯合物,阻止血液凝固。枸櫞酸鹽抗凝劑的抗凝力不如上述抗凝劑。枸櫞酸鈉與血液的抗凝比例為l:9或1:4.適用于紅細(xì)胞沉降率、凝血檢查,是輸血保養(yǎng)液的成分。 |
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