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喜自然果凍新蟲 (初入文壇)
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Taqman探針法RT-PCR的實驗體系實驗步驟哪位大神能夠發(fā)一下��！ 已有4人參與
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網(wǎng)上找的基本都是燃料法的，探針法的也只是一些原理， 我想要實際實驗的體系、步驟的，哪位大牛能發(fā)一下 |
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2樓2015-08-15 00:41:26
helios_hj
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3樓2015-08-15 10:18:00
喜自然果凍
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4樓2015-08-17 08:36:11
vivd娟
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5樓2015-08-17 10:13:56
6樓2015-08-18 15:42:55
喜自然果凍
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7樓2015-08-25 10:34:53
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8樓2015-08-25 10:38:02
9樓2018-09-21 13:57:03
【答案】應(yīng)助回帖
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基本步驟：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對； 2、 引物、探針的設(shè)計； 3、 引物探針的合成； 4、 反應(yīng)體系的配制； 5、 反應(yīng)條件的設(shè)定； 6、 反應(yīng)體系和條件的優(yōu)化； 7、 熒光曲線和數(shù)據(jù)分析； 8、 標(biāo)準(zhǔn)品的制備； Biodai Taqman 探針設(shè)計 一般設(shè)計原則： 探針位置盡可能地靠近上游引物； 探針長度通常在25－35bp，Tm值在65－70℃，通常比引物TM高5－10℃，GC含量在40%－70%。 探針的5’端應(yīng)避免使用堿基G。 整條探針中，堿基C的含量要明顯高于G的含量。 為確保引物探針的特異性，最好將設(shè)計好的序列在blast中核實一次，如果發(fā)現(xiàn)有非特異性互補區(qū)，建議重新設(shè)計引物探針。 |
10樓2019-02-19 08:43:22
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