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cady.gao鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
T克隆連接,遲遲連接不上
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小弟的載體使用自己改造過的質(zhì)粒PYA4278,用AhdI酶切后露出的是T末端,載體大小為5160bp,目的片段是重疊后的產(chǎn)物,左臂+SPC+右臂=2568bp,使用天根的一般taq酶72℃延伸30min,16℃連接過夜,用寶生物的solutionI連接,隔天使用Ca轉(zhuǎn),所轉(zhuǎn)感受態(tài)為自己制備的沙門氏菌的感受態(tài)。別人的同時做,使用同樣的感受態(tài)都連接成功了,我的卻遲遲連不上,不知道是什么原因,還請各位大神幫忙分析一下。 連接首先測定濃度,然后按照摩爾比1:1進行計算后添加連接,連接體系為10ul。 |
鐵桿木蟲 (知名作家)
Dark Lord of the Sith

新蟲 (小有名氣)
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