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cady.gao鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
T克隆連接，遲遲連接不上
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小弟的載體使用自己改造過的質(zhì)粒PYA4278，用AhdI酶切后露出的是T末端，載體大小為5160bp，目的片段是重疊后的產(chǎn)物，左臂+SPC+右臂=2568bp，使用天根的一般taq酶72℃延伸30min，16℃連接過夜，用寶生物的solutionI連接,隔天使用Ca轉(zhuǎn)，所轉(zhuǎn)感受態(tài)為自己制備的沙門氏菌的感受態(tài)。別人的同時做，使用同樣的感受態(tài)都連接成功了，我的卻遲遲連不上，不知道是什么原因，還請各位大神幫忙分析一下。 連接首先測定濃度，然后按照摩爾比1：1進行計算后添加連接，連接體系為10ul。 |
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4樓2019-01-02 22:57:57
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