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pigg9鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
高GC含量DNA序列測(cè)序應(yīng)注意哪些因素
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小弟最近在做幾個(gè)高GC含量DNA的cloning,今天剛剛完成全部的cloning，并跑了帶確認(rèn)長(zhǎng)度沒(méi)問(wèn)題。于是，就開(kāi)始準(zhǔn)備測(cè)序了。不過(guò)小弟以前并沒(méi)有做過(guò)高GC含量DNA的測(cè)序，不清楚要注意哪些因素（比方說(shuō)primer改怎么設(shè)計(jì)，PCR時(shí)要注意哪些等等之類(lèi)的），才能保證序列能夠被讀出的同時(shí)，亦能保證其可信性（準(zhǔn)確率）。因?yàn)槲覀儗?shí)驗(yàn)室，我是第一個(gè)開(kāi)始做高GC含量DNA的cloning，周?chē)軌蛘?qǐng)教的人不多。還請(qǐng)各位大神走過(guò)路過(guò)幫幫小弟一下，萬(wàn)分感激。 四個(gè)高GC含量DNA片段的長(zhǎng)度都在1600 bp 到1770 bp。而這四個(gè)片段的GC含量分別是，45% （這個(gè)其實(shí)不算高），62%， 75%，78%。我們實(shí)驗(yàn)室測(cè)序PCR用的酶是applied biosystems 的Big Dye.看了官網(wǎng)的說(shuō)明書(shū)未發(fā)現(xiàn)關(guān)于高GC含量DNA做測(cè)序時(shí)的注意事項(xiàng)（也可能是我眼花了）。 還請(qǐng)各位撥冗指點(diǎn)小弟。 謝謝 |
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2樓2019-05-10 15:24:11
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