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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 二代測序的問題
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[求助]
二代測序的問題 已有1人參與
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昨天剛接觸二代測序，有很多問題不懂，可能大神會覺得這些問題很幼稚，但是 還是懇請能夠詳細回答一下 二代測序中 末端補平的作用是什么？ 割膠純化這一步驟， DNA不是雙鏈結構嗎？如果是，那為什么需要留下連接完整的產物，去掉殘缺不全的？而且，割膠會不會去掉接頭？ |
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gaoyang636
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sxfldn: 回帖置頂 2015-08-26 08:32:01
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嚴謹一點的話，應該請你把你看的這個protocol發(fā)一下，才好解答。 目前我姑且認為你在問的是傳統(tǒng)建庫步驟的問題。 末端補平是因為前一步的物理打斷步驟產生的DNA片段兩端有可能為長短不一的粘端，需要先補平，再形成1bp的A堿基的小粘端，才能較高效地連接帶T粘端的接頭。 切膠是為了選擇合適大小的DNA片段，與雙鏈與否沒啥特殊關系。并且理論上通過切膠一般也達不到”選擇完整“”去除不全“的DNA片段的目的。 如果切膠選擇的size比較大，可以比較有效的去除接頭及二聚體。 PS：現在切膠用的少了，常用的是AMPure Beads磁珠處理。 |
2樓2015-08-25 10:32:11
3樓2015-08-26 08:30:52
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