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sxfldn新蟲 (初入文壇)
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[求助]
二代測(cè)序的問(wèn)題 已有1人參與
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昨天剛接觸二代測(cè)序,有很多問(wèn)題不懂,可能大神會(huì)覺得這些問(wèn)題很幼稚,但是 還是懇請(qǐng)能夠詳細(xì)回答一下 二代測(cè)序中 末端補(bǔ)平的作用是什么? 割膠純化這一步驟, DNA不是雙鏈結(jié)構(gòu)嗎?如果是,那為什么需要留下連接完整的產(chǎn)物,去掉殘缺不全的?而且,割膠會(huì)不會(huì)去掉接頭? |
木蟲 (著名寫手)
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嚴(yán)謹(jǐn)一點(diǎn)的話,應(yīng)該請(qǐng)你把你看的這個(gè)protocol發(fā)一下,才好解答。 目前我姑且認(rèn)為你在問(wèn)的是傳統(tǒng)建庫(kù)步驟的問(wèn)題。 末端補(bǔ)平是因?yàn)榍耙徊降奈锢泶驍嗖襟E產(chǎn)生的DNA片段兩端有可能為長(zhǎng)短不一的粘端,需要先補(bǔ)平,再形成1bp的A堿基的小粘端,才能較高效地連接帶T粘端的接頭。 切膠是為了選擇合適大小的DNA片段,與雙鏈與否沒啥特殊關(guān)系。并且理論上通過(guò)切膠一般也達(dá)不到”選擇完整“”去除不全“的DNA片段的目的。 如果切膠選擇的size比較大,可以比較有效的去除接頭及二聚體。 PS:現(xiàn)在切膠用的少了,常用的是AMPure Beads磁珠處理。 |
新蟲 (初入文壇)
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