 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 698 | 回復(fù): 2 | ||
無心之感金蟲 (正式寫手)
紫霄洞洞主
|
[求助]
分子clone之小白求助篇 已有2人參與
|
 本菜鳥最近遇到個(gè)頑固的作死cloning，硬生生死活連不上吶。你到底要鬧哪樣。 此處省略吐槽字樣一千。。進(jìn)入正題： 問題描述：準(zhǔn)備構(gòu)建一個(gè)某蛋白定位載體，準(zhǔn)備連接的片段有兩個(gè)：該基因自身的Promoter（長約2K），Genomic（長約3K）測序都沒問題；載體是pCAMBIA1301附帶有EGFP序列（常用的植物表達(dá)載體）。雙酶切回收后，使用T4 liagse（TaKaRa公司的）。反應(yīng)體系如下： T4 liagse....................... 2 ul Promote片段................10ul Genomic 片段................10ul pCAMBIA 1301.............. 4ul T4 buffer...................... 3ul 反應(yīng)溫度: 常溫； 反應(yīng)時(shí)間：4h， 然后轉(zhuǎn)化。 但是。。 問題來了。為嘛它就是連不上捏。。 片段雙酶切回收沒有問題，酶切后1301空載也不長，說明載體已經(jīng)切開了。難道是T4酶的問題？ 別的我也想不到了。 歡迎來和我討論幫忙解決問題！歡迎提供新的方法（如此最好）！但凡有益，即發(fā)賞賜～  |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有139人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
evangelina
無蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 72 (初中生)
- 金幣: -31.9
- 紅花: 3
- 帖子: 135
- 在線: 58.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 3180737
- 注冊: 2014-05-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 病毒學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
無心之感: 金幣+5, ★有幫助, 值得借鑒的方法 2015-08-26 13:47:25
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
無心之感: 金幣+5, ★有幫助, 值得借鑒的方法 2015-08-26 13:47:25
首先看看有沒有拿錯(cuò)盤了 有時(shí)糊涂了抗生素用錯(cuò)然后這種三個(gè)片段連的，一般比兩個(gè)片段連的困難一點(diǎn) 我們實(shí)驗(yàn)室一般會(huì)先把兩個(gè)短的室溫連個(gè)2-3小時(shí)，然后把最長的加進(jìn)去（一般是載體）4度連一晚上 還有可以做個(gè)T4的陽性對照，確保你的酶沒有問題 在或者換個(gè)菌株試試？祝你成功 |
2樓2015-08-26 11:48:36
string1987
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1178.3
- 散金: 25
- 紅花: 3
- 帖子: 157
- 在線: 38.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 825536
- 注冊: 2009-08-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
3樓2015-08-26 12:47:19
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 無心之感 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 295材料工程專碩求調(diào)劑 +5 | 1428151015 2026-03-27 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 1428151015 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽陽哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +4 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | hanamiko 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | 江辭666 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+5
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑 +4 | 舉個(gè)栗子oi 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 294分080500材料科學(xué)與工程求調(diào)劑 +4 | 柳溪邊 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿河工大 081700 276求調(diào)劑 +4 | 地球繞著太陽轉(zhuǎn) 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3 | 江往賣魚 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷 +6 | cccchenso 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +15 | Zhao anqi 2026-03-22 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 冬十三 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +3 | desto 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | ALULU4408 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | Zhangbod 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
一志愿東華大學(xué)控制學(xué)碩320求調(diào)劑
+3
|
Grand777 2026-03-21 | 3/150 |
|