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fe123333金蟲 (小有名氣)
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[求助]
各位大神，求助一下雙向電泳橫紋問題，跪謝！ 已有2人參與
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各位大神，我做的是霉菌蛋白的雙向電泳，用的是伯樂17cm ph 3-10 線性的膠條，染色方法為銀染但是跑了很多次都有嚴(yán)重的橫紋出現(xiàn)，不知道是提取蛋白時出了問題（鹽離子之類的問題）還是等電聚焦程序設(shè)定出了問題。最近愁死了，都快抑郁了，誰能幫我分析一下，歡迎交流討論。灰常感謝��！ 下面是蛋白提取方法、等電聚焦程序和膠圖。 提取總蛋白： （1）研磨：預(yù)先將研缽置于-20℃的冰箱內(nèi)冷凍；取液氮凍存的菌體，放入預(yù)冷的研缽內(nèi)研磨至粉末狀； （2）抽提：20mM Tris-Cl，0.5% Triton X-100 (v/v)，0.5M EDTA，pH 8.0，0.07% β-巰基乙醇，蛋白酶抑制劑； （3）離心：12000 rpm，4℃，離心10 min （4）沉淀：利用氯仿甲醇沉淀法移除核酸和色素。 17cm膠條(PH3-10)的等電聚焦程序 水化 50V 14h 主動水化 S1 250V 線性 1h 除鹽 S2 500V 線性 1h 除鹽 S3 1000V 快速 1h 除鹽 S4 10,000V 線性 5h 升壓 S5 10,000V 快速 90,000Vh 聚焦 S6 500V 快速 12h 保持 2D圖.jpg |
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4樓2015-11-09 14:55:20
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