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[求助]
基因組DNA為模板進行PCR，第一次擴出來了，后面怎么重復都不行。 已有12人參與
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提取秀麗線蟲基因組DNA，以此為模板進行PCR擴增，目的片段2300bp。使用Q5 高保真DNA聚合酶，25ul體系（7.25ul H2O＋5ul 5×buffer＋2ul 2.5mM dNTP＋1.25ul上游引物＋1.25ul下游引物＋3ul 模板＋5ul GC Enhancer＋0.25ul Q5酶）。第一次擴增成功，但是之后模板用沒了又重新提了3次基因組DNA，始終不能擴增出目的片段，退火溫度從50度到72度都試過了，不行，Taq酶也試過了，不行。 第一次擴增成功（最上面那條帶） .jpg 最初使用的條件.png 后來的結(jié)果就一直是這樣的.png |
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chaochaosoul
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