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woai43金蟲 (正式寫手)
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[求助]
BSP上下游引物TM值差異大導(dǎo)致擴(kuò)增不成功
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| 由于考慮GC位點(diǎn)，亞硫酸鹽處理后的上游可設(shè)計引物區(qū)域?yàn)椋篏GGTATATAATAGGGATGGGAGGATTGTATAGAGAAGTTAA；下游為：GTTTTTTTAAGAGATTAGATTTTATAAATTTTTTTTTTAT。上下游GC%含量差異較大，設(shè)計引物后上游引物TAATAGGGATGGGAGGATTGTATAG，其TM值為58，下游引物TTATAAAATCTAATCTCTTAAAAAAAC，其TM值為51，嘗試梯度PCR48-58度均未P出，touchdown PCR從60降至52度未P出。酶為TAKARA的LA TAQ。請問有何解決方法，非常感謝~~~ |
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