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woai43金蟲 (正式寫手)
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[求助]
BSP上下游引物TM值差異大導致擴增不成功
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| 由于考慮GC位點，亞硫酸鹽處理后的上游可設計引物區(qū)域為：GGGTATATAATAGGGATGGGAGGATTGTATAGAGAAGTTAA；下游為：GTTTTTTTAAGAGATTAGATTTTATAAATTTTTTTTTTAT。上下游GC%含量差異較大，設計引物后上游引物TAATAGGGATGGGAGGATTGTATAG，其TM值為58，下游引物TTATAAAATCTAATCTCTTAAAAAAAC，其TM值為51，嘗試梯度PCR48-58度均未P出，touchdown PCR從60降至52度未P出。酶為TAKARA的LA TAQ。請問有何解決方法，非常感謝~~~ |
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