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千尋@德院銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
腹水硫酸銨沉淀后上proteinG 柱子需要透析除鹽嗎？ 已有2人參與
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問一下，腹水硫酸銨純化大家都用的什么方法呢？看到有除鹽的也有不除鹽的，向后面再接著用rotein G的柱子純化，是不是不需要硫酸銨這一步呢？ 這個方法怎么樣，也是從網(wǎng)上看到的 1. 待提取樣品經(jīng)4℃或室溫離心13 000r/min(20000×g)，30min，收集上清； 2. 取上清約20ml與等體積生理鹽水混合后，于攪拌下緩慢滴加40ml SAS，于4℃沉淀30min以上或過夜，使蛋白充分沉淀。 3. 13 000r/min，10min 4℃離心，棄上清。 4. 用12ml生理鹽水溶解沉淀，同步驟（2）滴加8ml SAS，4℃1h。 5. 重復步驟（3）離心，用13.3ml生理鹽水溶解沉淀， 6. 滴加6.6ml SAS，4℃1h； 7. 重復步驟（4）離心后所得沉淀物用少許鹽水溶解沉淀，并裝入透析袋。 8. 用大于20倍體積的PBS于4℃透析，更換透析液數(shù)次，可置-20℃保存或進一步純化。 |
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千尋@德院
銅蟲 (小有名氣)
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