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18734780938鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
pcr怎樣才能擴(kuò)出15k以上的目的條帶？ 已有8人參與
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從全基因組中pcr一段15k的片段，始終不能獲得目的條帶。試過了各種酶，優(yōu)化了條件，試過增加鎂離子濃度，最后用Ex-taq只能夠獲得8000bp以上的彌散條帶，不知道該怎么辦？求高人幫助，不勝感激！ 50ul體系：Ex-taq 0.25 Buffer 10* 5 dNTP(0.25) 4 模板引物各1 Mgcl2 0.6 pcr 條件：98 30s 98 10s 55 30s 72 30min 72 7min 進(jìn)行了10個(gè)cycles 結(jié)果如下： 第一張是0.6、 0.8ul的Mgcl2 第二張是以上兩管膠回收以后作為模版相同條件重新pcr后的結(jié)果 1.png 2.png |
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2樓2015-08-31 12:02:25
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3樓2015-08-31 13:03:29
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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模版質(zhì)量要高，另外擴(kuò)增酶質(zhì)量要好，最好加點(diǎn)擴(kuò)增增強(qiáng)因子 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-08-31 13:32:08
18761615793
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 15kb是簡單模板還是基因組模板啊，一般的熱啟動(dòng)Taq酶已經(jīng)算不錯(cuò)了能擴(kuò)增10kb以下的，15kb的話長片段酶就能達(dá)到要求了，要注意優(yōu)化buffer等條件，看看這篇資料吧 http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html 關(guān)于擴(kuò)增選擇，應(yīng)該對(duì)你有用吧 |
5樓2015-09-01 10:00:52
6樓2015-09-01 14:04:08
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10樓2015-09-02 13:35:26
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