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18734780938鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
pcr怎樣才能擴(kuò)出15k以上的目的條帶？ 已有8人參與
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從全基因組中pcr一段15k的片段，始終不能獲得目的條帶。試過(guò)了各種酶，優(yōu)化了條件，試過(guò)增加鎂離子濃度，最后用Ex-taq只能夠獲得8000bp以上的彌散條帶，不知道該怎么辦？求高人幫助，不勝感激！ 50ul體系：Ex-taq 0.25 Buffer 10* 5 dNTP(0.25) 4 模板引物各1 Mgcl2 0.6 pcr 條件：98 30s 98 10s 55 30s 72 30min 72 7min 進(jìn)行了10個(gè)cycles 結(jié)果如下： 第一張是0.6、 0.8ul的Mgcl2 第二張是以上兩管膠回收以后作為模版相同條件重新pcr后的結(jié)果 1.png 2.png |
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791945301
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 428.4
- 帖子: 36
- 在線: 23.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2798201
- 注冊(cè): 2013-11-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
9樓2015-09-02 10:57:53
evangelina
無(wú)蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 72 (初中生)
- 金幣: -31.9
- 紅花: 3
- 帖子: 135
- 在線: 58.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3180737
- 注冊(cè): 2014-05-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 病毒學(xué)
2樓2015-08-31 12:02:25
hc-material
專家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +702 - 應(yīng)助: 517 (博士)
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- 性別: GG
- 專業(yè): 核技術(shù)及其應(yīng)用
- 管轄: 生物科學(xué)
3樓2015-08-31 13:03:29
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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模版質(zhì)量要高，另外擴(kuò)增酶質(zhì)量要好，最好加點(diǎn)擴(kuò)增增強(qiáng)因子 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2015-08-31 13:32:08
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