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淘七九懶鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
red同源重組做敲除時 電入片段后pcr無條帶??
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如題,在大腸JM109中用red同源重組做敲除時,電入擴增好的片段,然后PCR驗證是否敲除成功。照理說無論是否敲除成功,都該有條帶的(若成功,該是1500bp;不成功,該是基因大小)?晌业腜CR結果是陽性對照(肯定含該基因的菌)都有基因大小的條帶,做了電擊的都沒有條帶。。。然后我提基因組驗證,有的敲除成功,可是抗性一直消不掉。 有以下問題:我的pcr是用95度10min預變性,95度30s變性。而且陽性對照都出了很好的條帶,為甚么做了電擊的菌做菌落pcr就沒東西出來?而提了基因組又能有條帶的?為啥后面消抗老不長?? |
敲除驗證 |
金蟲 (正式寫手)

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