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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » PCR目的基因
| 查看: 1256 | 回復: 18 | ||||
5150416新蟲 (小有名氣)
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[交流]
PCR目的基因
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問一下大家在PCR時候有沒有遇到像我這樣的情況，就是怎么p就是p不出來，引物是重新?lián)Q的，還是p不出來，你們將退貨溫度調到比設計的高多少或少多少，大家有木有好的方法，還請大家給個建議，謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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退火溫度:55-65，有段時間我的pcr也是怎么也p不出來，后來加大了模板濃度，才過得pcr產物，或者更換好一點的酶試試。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-09-07 07:51:25
18761615793
木蟲 (正式寫手)
小蟲
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5150416: 金幣+5 2015-09-07 09:53:40
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5150416: 金幣+5 2015-09-07 09:53:40
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哎~ 首先確定你的模板有沒有降解，提取多長時間了 其次引物不是換新的就可以的，引物特異性需要驗證 然后關于酶，不知道你的目的片段大小多少，GC含量如何，建議先看看如何選酶根據大小和下游應用選擇 http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html，一般的熱啟動聚合酶能夠滿足擴增， 最好按照酶的說明書設置反應條件和配置反應體系，一般不是一次成功的話，摸索退火溫度，如果雜帶多，升高退火溫度如果沒有條帶可降低退火溫度，另外根據目的片段大小配置合適膠濃度，，，太多了具體的看看一下文檔吧 有問題解決和提高特異性的方法總結，還有一篇是關于操作的，有很多注意的點 http://www.detaibio.com/topics/pcr-sop.html http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html |
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5150416
6樓2015-09-07 09:36:02
2樓2015-09-07 00:32:16
阿Q~~
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