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sf9昆蟲細(xì)胞表達(dá)——Western Blot驗證表達(dá)效果，多條帶都是目的帶？
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目的：最近在嘗試用昆蟲細(xì)胞做桿狀病毒轉(zhuǎn)染表達(dá)重組蛋白，目的蛋白接近60kD。 樣品：現(xiàn)在我有三個重組DNA（編號1,2,3，指代下圖），大小差別不大，氨基酸組成差異小于10%。pfastBac 1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)座DH10BAC后為白斑，酶切位點(diǎn)選用BamHI和HindIII，C端加入6*HIS-tag標(biāo)簽。 操作：我用轉(zhuǎn)染sf9 (6孔板) 一周的培養(yǎng)基上清直接轉(zhuǎn)至T25的細(xì)胞瓶中，72h收集細(xì)胞做的WB。當(dāng)時細(xì)胞的狀態(tài)沒有拍照，WB的圖譜如圖所示。 問題：除了目的帶（理論大�。┲�，還有很多其他條帶，難道都是表達(dá)產(chǎn)物（可以識別his單抗）？請教各位大神幫忙，有什么原因可能會導(dǎo)致多條帶的情況啊，降解？ 現(xiàn)在不知道如何驗證了！？先謝過大家了！ WB.jpg |
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2樓2015-09-09 22:13:03
dalian0725
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3樓2015-11-25 10:57:13
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