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liuruikiki新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)——Western Blot驗(yàn)證表達(dá)效果，多條帶都是目的帶？
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目的：最近在嘗試用昆蟲(chóng)細(xì)胞做桿狀病毒轉(zhuǎn)染表達(dá)重組蛋白，目的蛋白接近60kD。 樣品：現(xiàn)在我有三個(gè)重組DNA（編號(hào)1,2,3，指代下圖），大小差別不大，氨基酸組成差異小于10%。pfastBac 1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)座DH10BAC后為白斑，酶切位點(diǎn)選用BamHI和HindIII，C端加入6*HIS-tag標(biāo)簽。 操作：我用轉(zhuǎn)染sf9 (6孔板) 一周的培養(yǎng)基上清直接轉(zhuǎn)至T25的細(xì)胞瓶中，72h收集細(xì)胞做的WB。當(dāng)時(shí)細(xì)胞的狀態(tài)沒(méi)有拍照，WB的圖譜如圖所示。 問(wèn)題：除了目的帶（理論大�。┲�，還有很多其他條帶，難道都是表達(dá)產(chǎn)物（可以識(shí)別his單抗）？請(qǐng)教各位大神幫忙，有什么原因可能會(huì)導(dǎo)致多條帶的情況啊，降解？ 現(xiàn)在不知道如何驗(yàn)證了��？先謝過(guò)大家了！ WB.jpg |
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dalian0725
新蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2015-11-25 10:57:13
liuruikiki
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2樓2015-09-09 22:13:03
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