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一旺百旺新蟲 (著名寫手)
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[交流]
關(guān)于脂質(zhì)體制備的過程中遇到的幾個(gè)問題，交流一下大家的解決方法 已有10人參與
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背景介紹：方法是薄膜法，欲包裹藥物鹽酸布比卡因，輔料是蛋黃卵磷脂和膽固醇。實(shí)驗(yàn)設(shè)備是旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，搖床，冷凍干燥設(shè)備。 實(shí)驗(yàn)過程是蛋黃卵磷脂200mg和膽固醇94g溶于20ml氯仿，加入250ml的圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1-3個(gè)小時(shí)，(旋轉(zhuǎn)速度50r/min,37攝氏度，真空度0.1MPa),冷凍干燥機(jī)抽真空（真空度0.1MPa，30度），之后用20ml-30ml的pH=7.4的磷酸緩沖液溶解200mg的布比卡因后加入圓底燒杯中，放置于搖床上37攝氏度，150r/min過夜，0.8um的濾頭過濾，很難過濾。用了半上午終于過濾了一些，之后測(cè)粒徑和掃描電鏡。 問題：1.實(shí)驗(yàn)其實(shí)目標(biāo)的粒徑在10-30um，但是薄膜法要獲取這個(gè)粒徑還是有一定難度的，大多是通過復(fù)乳法獲得這個(gè)粒徑范圍的，如果用薄膜法，加入二棕櫚酰磷脂酰甘油DPPG和三辛酸甘油酯TO是否能夠獲得這個(gè)粒徑范圍的脂質(zhì)體，或者用這些輔料通過薄膜法怎么樣才有可能獲得這個(gè)粒徑范圍的脂質(zhì)體。 2.稱量蛋黃卵磷脂的時(shí)候遇到一個(gè)非常棘手的問題就是如何準(zhǔn)確稱量幾十毫克或者幾百毫克的蛋黃卵磷脂，因?yàn)樗幤繁容^貴中，買的量不多，而蛋黃卵磷脂容易黏在藥匙上，藥匙上會(huì)浪費(fèi)很多，最后解決的方法是直接稱量到燒杯中，藥匙用超小的藥匙，有的人提建議是用減重法，將整包藥都稱量一下，然后取出來一部分后，藥匙上的用后續(xù)的溶液沖洗來，感覺操作起來還是挺有難度的，另一種方法是直接將買來的1g蛋黃卵磷脂都配成濃溶液，但是感覺溶液的穩(wěn)定性很難保證，不知道還有別的好辦法去準(zhǔn)確稱量？另外不知道二芥酰卵磷脂DEPC和二棕櫚酰磷脂酰甘油DPPG是否和蛋黃卵磷脂一樣很粘稠，稱量的時(shí)候也會(huì)遇到這種情況？ 3.實(shí)驗(yàn)方案中加入的蛋黃卵磷脂和膽固醇是否是太多了？有人指出蛋黃卵磷脂的濃度應(yīng)在1-5mg/ml，這個(gè)濃度是否靠譜，這個(gè)濃度的溶劑是氯仿還是后面的緩沖液？用的圓底燒瓶是否有點(diǎn)大？蛋黃卵磷脂和膽固醇的比例一般多少合適呢？看資料上大多是摩爾比2：1 4.鹽酸布比卡因藥典上寫的是溶于水的，為啥加入磷酸緩沖液溶解的時(shí)候感覺很多都沒有溶解呢，超聲了一下，效果不是很好。 5.做完以后發(fā)現(xiàn)成膜有點(diǎn)不均勻，不是人家均勻透明的膜，我感覺可能是我的輔料配比有問題，我的配比是否真有很大問題？ 6.測(cè)粒徑的時(shí)候用的是馬爾文2000來測(cè)，測(cè)的時(shí)候是稀釋于生理鹽水中測(cè)的，測(cè)試過程中，需要知道樣品的折光率，但是這個(gè)折光率大概應(yīng)該是在什么范圍呢？不同的折光率測(cè)出來的結(jié)果差別還是挺大的，最后得出來這么多的結(jié)果怎么看哪個(gè)更可用呢？看擬合曲線后的偏差？還是什么？如果看偏差的話偏差小于多少可以認(rèn)為是可信的呢？ 7.測(cè)掃描電鏡，樣品應(yīng)該怎么處理呢？我們的掃描電鏡能測(cè)的只能是粉末，本來考慮用抽真空把液體抽干，放在培養(yǎng)皿上試了試，結(jié)果很快的出現(xiàn)了白色粉了，但是又過了半個(gè)小時(shí)以上吧，又成透明的膜的狀態(tài)了，用東西刮下來，有點(diǎn)黏糊，沒有辦法測(cè)電鏡。我在想這個(gè)過程很詭異，怎么解釋呢，這樣處理樣品是否存在問題，脂質(zhì)體應(yīng)該都破了吧，想著再試試?yán)鋬龈稍�，但是覺得還是存在問題的，脂質(zhì)體能禁得起這樣折騰？膜結(jié)構(gòu)被破壞了吧。如果要冷凍干燥的話應(yīng)該怎么進(jìn)行呢？ |
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5樓2016-01-17 20:50:14
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