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loveming313

新蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 請(qǐng)大家?guī)蛶兔�，這個(gè)PCR程序是什么意思？如何在PCR儀上設(shè)置？

請(qǐng)大家?guī)蛶兔Γ@個(gè)PCR程序是什么意思？如何在PCR儀上設(shè)置？
1.這是屬于跳躍PCR ,還是什么?
2.這種PCR用普通taq酶可以P嗎？
3.在PCR儀上如何設(shè)置這個(gè)程序？
4.PCR程序中變性、退火、延伸的反應(yīng)時(shí)間是怎么確定的？和哪些因素（如酶、擴(kuò)增片段、模板）有關(guān)？

搜狗截圖15年09月09日PCR程序.png

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1樓 2015-09-09 17:07:27

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lini-828127

木蟲(chóng) (小有名氣)

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引用回帖:

16樓: Originally posted by loveming313 at 2015-09-20 08:01:44
謝謝回復(fù)，我知道怎么PCR，是想麻煩蟲(chóng)友是否能夠?qū)?50bp目的擴(kuò)增條帶，引物如上所說(shuō)，提供一些反應(yīng)條件的建議
...

850bp的話建議變性30s，退火30s，延伸時(shí)間60s，溫度按所使用的酶定。

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20樓2015-09-20 12:13:51

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顧在

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你這是做什么實(shí)驗(yàn)用的呢，循環(huán)數(shù)也沒(méi)有，退火溫度是與引物相關(guān)，而延伸時(shí)間與擴(kuò)增片段大小相關(guān)，大概只知道是兩步pcr

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2樓2015-09-09 17:42:10

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梟翔

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降落PCR，第5步應(yīng)該10個(gè)循環(huán)，第9步應(yīng)該25個(gè)循環(huán)。

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3樓2015-09-09 18:51:40

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loveming313

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 顧在 at 2015-09-09 17:42:10
你這是做什么實(shí)驗(yàn)用的呢，循環(huán)數(shù)也沒(méi)有，退火溫度是與引物相關(guān)，而延伸時(shí)間與擴(kuò)增片段大小相關(guān)，大概只知道是兩步pcr

是突變型小鼠鑒定用的，擴(kuò)增片段為850bp 和666bp,循環(huán)數(shù)第一個(gè)是10，第二個(gè)是28.
我不知道第4部后面0.5C per cycle 是什么意思？

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4樓2015-09-10 08:01:25

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簡(jiǎn)單回復(fù)

大小白白14樓

2015-09-19 17:47 回復(fù)

小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

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