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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 生物化學 » 5‘RACE做了大半年無果
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[求助]
5‘RACE做了大半年無果 已有1人參與
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| 有誰做RACE的嗎？我做5’RACE做了幾個月了，一無所獲，剛開始是不出帶，后來出了一個帶測序不對。現(xiàn)在換個引物，出了帶子竟然有兩條，想拿去測序，轉化藍白斑時，盤子長不出斑點了，都是糊的，重復了幾次還是糊的，不曉得哪里出問題了。還有5‘RACE的引物是從3’RACE克隆出的片段里摳出來的，是不是我之前3‘RACE做的不好，導致5'RACE的引物不好，所以5’RACE才不好出帶呢，各位達人們，能否給點意見或建議呢 |
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Huobol
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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做RACE，模板質量是第一地位的，也就是你反轉錄前的rna是很重要的，可以考慮重新合成模板。而且要做巢式PCR，多設計幾個引物，我設計了6個才弄出來，當然還得看運氣，我?guī)蛶熜肿隽艘粋�基因的race，還是我設計的引物，各設計了2個引物，引物回來的當天下午做了兩輪PCR就把5'和3'都P出亮帶了，當然第一輪無亮帶，把一輪產物稀釋后做二輪巢氏引物PCR后成功P出亮帶，送測序也都是對的。做race的心得網上再搜搜吧～有時運氣很重要，最近我的運氣不是很好，做啥都很慢啊～哈哈～ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-09-09 20:42:00
liubolin945
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3樓2015-10-27 09:35:44
yuguiyan
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4樓2016-06-09 21:09:09
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