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5‘RACE做了大半年無果 已有1人參與
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| 有誰做RACE的嗎?我做5’RACE做了幾個月了,一無所獲,剛開始是不出帶,后來出了一個帶測序不對。現(xiàn)在換個引物,出了帶子竟然有兩條,想拿去測序,轉化藍白斑時,盤子長不出斑點了,都是糊的,重復了幾次還是糊的,不曉得哪里出問題了。還有5‘RACE的引物是從3’RACE克隆出的片段里摳出來的,是不是我之前3‘RACE做的不好,導致5'RACE的引物不好,所以5’RACE才不好出帶呢,各位達人們,能否給點意見或建議呢 |
至尊木蟲 (著名寫手)
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做RACE,模板質(zhì)量是第一地位的,也就是你反轉錄前的rna是很重要的,可以考慮重新合成模板。而且要做巢式PCR,多設計幾個引物,我設計了6個才弄出來,當然還得看運氣,我?guī)蛶熜肿隽艘粋基因的race,還是我設計的引物,各設計了2個引物,引物回來的當天下午做了兩輪PCR就把5'和3'都P出亮帶了,當然第一輪無亮帶,把一輪產(chǎn)物稀釋后做二輪巢氏引物PCR后成功P出亮帶,送測序也都是對的。做race的心得網(wǎng)上再搜搜吧~有時運氣很重要,最近我的運氣不是很好,做啥都很慢啊~哈哈~ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

鐵蟲 (小有名氣)

至尊木蟲 (文壇精英)
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