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Snuggle安新蟲 (初入文壇)
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[求助]
大家在做western blot實驗時,樣品都是怎么處理的呀? 已有2人參與
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RT 最近要開始做Western blot,我的樣品是動物藥的細粉,樣品制備的話是不是不能直接稀釋上樣?要是做前處理的話,需要怎么處理比較好呢? 我查了一些,發(fā)現(xiàn)每個不同的樣品,處理方法也不同,大家做western時都是怎么處理樣品的呢? 剛剛涉及生物這方面,新手很多東西都不太懂,大家一起來交流,我也多學(xué)習(xí)一下~ |
木蟲之王 (知名作家)
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我的樣品使肌肉組織:取適量背最長肌樣品,加入裂解液(0.15M NaCl,20mM Tris–HCl(pH 8.0),1mM EDTA,1mM PMSF,0.1μM E-46,0.08μM aprotinin,0.1μM leupetin,0.1%NP-40)進 行勻漿并置冰上充分裂解 30min,之后再用超聲波破碎儀處理,于 4℃下 12000rpm/min 離心 10min,取上清用 BCA 法測定蛋白含量后分裝于 0.5mL 離心管中并置于-20℃保 存;取 50μg 蛋白與適量 5×上樣緩沖液(0.25mol/L Tris·HCl pH6.8,0.5mol/L 二硫叔 糖醇,10% SDS,0.5%溴酚藍,50%甘油)混合,煮沸 5min,在冰上冷卻后用于 Western blot 檢測。 |

金蟲 (正式寫手)
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