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Snuggle安新蟲 (初入文壇)
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[求助]
大家在做western blot實驗時，樣品都是怎么處理的呀？ 已有2人參與
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RT 最近要開始做Western blot，我的樣品是動物藥的細粉，樣品制備的話是不是不能直接稀釋上樣？要是做前處理的話，需要怎么處理比較好呢？ 我查了一些，發(fā)現(xiàn)每個不同的樣品，處理方法也不同，大家做western時都是怎么處理樣品的呢？ 剛剛涉及生物這方面，新手很多東西都不太懂，大家一起來交流，我也多學習一下~  |
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我的樣品使肌肉組織：取適量背最長肌樣品，加入裂解液（0.15M NaCl，20mM Tris–HCl（pH 8.0），1mM EDTA，1mM PMSF，0.1μM E-46，0.08μM aprotinin，0.1μM leupetin，0.1%NP-40）進 行勻漿并置冰上充分裂解 30min，之后再用超聲波破碎儀處理，于 4℃下 12000rpm/min 離心 10min，取上清用 BCA 法測定蛋白含量后分裝于 0.5mL 離心管中并置于-20℃保 存；取 50μg 蛋白與適量 5×上樣緩沖液（0.25mol/L Tris·HCl pH6.8，0.5mol/L 二硫叔 糖醇，10% SDS，0.5%溴酚藍，50%甘油）混合，煮沸 5min，在冰上冷卻后用于 Western blot 檢測。 |
6樓2015-09-11 21:31:51
jingshuikeke
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8樓2015-09-12 10:43:29
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9樓2015-09-12 10:47:30
10樓2015-09-12 11:10:18
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