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liuxinyueer木蟲 (正式寫手)
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[交流]
PCR的目的片段是2200bp左右，但是擴(kuò)增不出來 已有6人參與
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| PCR的目的片段是2200bp左右，但是擴(kuò)增不出來，出來的條帶在600bp左右，我用的酶是transstart KD plus dna polymerase，模板是逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA |
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biotech_zhou
木蟲 (著名寫手)
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5樓2016-04-25 17:16:35
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2樓2015-09-13 16:01:12
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| 如果模板是CDNA的話，模板質(zhì)量好壞很重要，還有就是引物設(shè)計(jì)很重要。PCR擴(kuò)不出來原因太多了，只能逐漸摸索，你說的太過廣泛，不好分析。你首先要確定你的CDNA 260/280在1.8-2才比較好，而且比較新不會(huì)降解的問題。而且比如50ul體系中，模板就100-300ng比較好，多了也不行。引物特別特別重要，退火我一般從53-58設(shè)置梯度除非比較特殊的情況。另外我推薦一個(gè)全式金的酶，fastPFUfly，加入硫酸鎂的，你可以試試。適用于復(fù)雜的模板 |
3樓2015-09-13 16:38:04
liutong1026
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4樓2015-09-14 13:23:38
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